相思子毒素的结构?:
(1)、相思子毒素的一级结构:
相思子毒素是一种分子质量约为63?ku~67?ku的糖蛋白,分子由A?、B两条多肽链通过1个二硫键连接而成。完整毒素在?SDS-?PAGE分析时呈一条蛋白带,经二巯基乙醇处理后,A、B两条链分离开,其中A链呈酸性,分子质量约为30?ku,与蓖麻毒素A链存在102个相同的氨基酸残基;B链呈中性,分子质量约35?ku。有关试验表明,相思子毒素两条链经二巯基乙醇还原分离开后,其活性并不丧失。
与蓖麻毒素相似,相思子毒素也是以前体蛋白形式表达,编码前体相思子毒素的基因组不含内含子,从5′端到3′端分别编码由34个氨基酸残基组成的前导序列,250个或251个氨基酸残基组成的A链,10个氨基酸残基组成的连接肽,267个或268个氨基酸残基组成的B链。34个氨基酸残基组成的前导序列很可能包含一个信号肽,诱导前体进入内质网,进行翻译后加工,然后再转运到种子蛋白储存部位,推测信号序列的切点位于第19位的Se
羧基端。
相思子毒素所含的糖基主要存在于B链上,糖的类型为甘露糖和N-乙酰葡萄糖胺,毒素经糖基修饰后,可以增加其自身结构的稳定性,防止降解,增强对极端条件的适应性。已阐明了Ab
i
-a?的B链的2个糖基化位点附近的氨基酸序列及糖链结构,糖肽附近的氨基酸顺序为Asp-As
(CHO)-Gly-Th
,Gly-As
(CHO)-As
,其序列分别类似于Rici
-D的B链Asp94-As
(CHO)-Gly-Th
97,Th
134?–As
(CHO)-As
136。
(2)、相思子毒素的高级结构:
晶体结构研究表明,相思子毒素A链分为3个折叠区域。ab
i
-a的A链C末端比蓖麻毒素少4个氨基酸残基。关于ab
i
-a及蓖麻毒素的A链折叠上的差异都有可能影响对核糖体的识别和结合。相思子毒素a的B链的整个折叠方式与蓖麻毒素相似,但它们的N末端氨基酸残基第1位~12位及几个突环(第39~45,100~106,109~118,133~139,166~170,193~204位氨基酸残基)有较大差异。Ab
i
-a的B链由2个区域组成,每个区域又包含4个亚区λ,α,β,γ,每一区域的主体结构是由α,β,γ组成,亚区2λ连接B链的2个区域,亚区1λ参与A,B链之间二硫键的形成,2个λ亚区间有同源性,但与其他亚区有区别,2个亚区的α,β,γ间均有同源性。除了1λ亚区,ab
i
-a的B链的其他亚区的氨基酸链长度与蓖麻毒素的相应亚区相同。ab
i
-a的1λ亚区N末端比蓖麻毒素的1λ亚区多4个氨基酸残基。Ab
i
-a的B链的每一个区域均包含一个疏水核,形状类似于蓖麻毒素的疏水核。早先有人提出了蓖麻毒素的B链的进化理论,认为B链的祖先是1α亚区,因为仅是1α肽链保留了所有的关键结构和功能特征,基因复制和融合产生了α?,β,γ分子,然后加上λ肽链进一步稳定了分子结构,再复制产生(α、β、γ、λ)2?结构[5-
化学成份?:
相思种子含相思子碱(ab
i
e)、相思子灵(ab
ali
e)、下箴刺桐碱(hypapho
i
e),N,N-二甲基色氨酸甲酯的甲阳离子(即下箴刺桐碱甲酯)(thyl?este
of?N,?N-dithylt
ypha
thocatio
)、相思豆碱(P
ecato
i
e)、胆碱(choli
e)、胡芦巴碱(t
igo
elli
e)、又含相思子毒蛋白(ab
i
)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,相思子凝集素Ⅰ、Ⅱ(A.P.AⅠ、Ⅱ)、蓖麻毒蛋白(
ici
)、相思子甾醇(ab
ici
)、相思子甾酮知(ab
idi
)、角鲨烯(squale
e)β-香树脂醇(β-ay
i
)、环木菠萝烯酸(cycloa
te
ol)、豆甾醉(stigaste
ol)、β-谷甾醇(β-sitoste
ol)、胆甾醇(choleste
ol)、菜油甾醇(capeste
ol)、5β-胆烷酸(5β-cho
ic?acid)、相思子酸(ab
sic?acid)、槐花二醇(sopho
adiol)、槐花二醇-22-O-乙酸酯(sopho
adiol-22-O-acetate)、常春藤皂甙元甲酯(bede
age
i
thyl?este
)、槐花皂甙Ⅲ甲酯(kaikasapo
i
Ⅲ?thyl?este
)、相思子皂醇J(ab
isaPoge
ol?J)、三甲基色氨酸(t
ithylt
ypha
)、相思子素(ab
i
)、相思子素-2-O-芹菜糖甙(ab
i